GT115 Chemically Competent Cell

基因型：

F- mcrA?(mrr-hsdRMS-mcrBC) f80lacZDM15?lacX74 recA1rpsL (StrR) endA1 ?dcm uidA(DMluI)::pir-116?sbcC-sbcD

簡要說明：

GT115菌株，是專門用來克隆含有發夾結構（Hairpin）或重復序列等DNA二級結構的基因序列的大腸桿菌菌株。大腸桿菌中存在一種SbcCD蛋白復合體，可以識別DNA發夾結構，并將其切除；將sbcC和sbcD兩個基因突變，增強了發夾結構DNA的穩定性。同時在大腸桿菌基因組中引入uidA(DMluI)::pir-116，使GT115可以表達 兀 蛋白，含有R6Kgori復制子的質粒( pCpG-mcs、pCpG-LacZ、pCpG-siRNA …)可以正常復制。rpsL賦予GT115lian霉素抗性，同時該菌株還含有核酸酶 (endA)突變、重組酶 (recA)突變，增強了外源DNA的穩定性。GT115感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率可達1×108 cfu/μg DNA。

操作說明：

1. 感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌塊融化，加入目的 DNA（質粒或連接產物） 并用手bo打 EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25 分鐘。

2. 42℃水浴熱激 45秒，迅速放回冰上并靜置 2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌SOC 或LB培養基，混勻后 37℃，200 rpm復蘇 60分鐘。 

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取 100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的 SOC 或 LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養 6.5 小時以上

注意事項：

1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8 分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入目的 DNA 時應輕柔操作。 

3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。